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葡聚糖酶(纤维素酶)检测底物使用说明书

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1.原理

该方法用于特异性检测纤维素酶制剂中的葡聚糖酶(内切纤维素酶)。孵育染色的纤维素和纤维素酶,底物通过内部作用被解聚产生低分子量的染色片段,之后在反应混合物中加入沉降剂,通过离心方法去除大分子量物质,测定上清液的颜色,参照标准曲线可以确定分析溶液中的内切纤维素酶。

 

2.底物

底物采用的是部分解聚的染色的羧甲基纤维素-4M,用蓝色染料R染色多聚糖,大约1个染料分子连接20个糖基。

 

3.溶解

2g粉状底物加入到带加热板和磁力搅拌棒搅拌的80mL剧烈沸腾的水中,之后关闭加热板,继续搅拌直到溶液/浆液匀质(大约20分钟),再加入5mL乙酸钠缓冲液(2MpH4.5),冷却溶液到室温。调节pH4.5,定容到100mL。该溶液可以储存在4℃下,在此条件下,并且不被内切纤维素酶污染时,该溶液可以稳定保存至少12个月。下次使用前,剧烈震荡储存瓶子将底物溶液混合。该溶液是粘性的,应用容积式移液器移取(如Eppendorf Multipette® with a 5.0 mL Combitip)。


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