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L-苹果酸酶法分析试剂盒

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原理:

测定L-苹果酸需要进行两步酶促反应,*步:在L-苹果酸脱氢酶(L-MDH)的催化作用下,L-苹果酸被烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)氧化生成草酰乙酸

第二步:为了使反应(1)完全进行,需要进行第二步反应,在超量的L-谷氨酸的存在下,由谷氨酸草酰乙酸转氨酶催化,草酰乙酸和L-谷氨酸生成L-天冬氨酸2–酮戊二酸

生成的NADH的量取决于L-苹果酸的量,NADH的量可根据340nm下吸光度值的增加测定。

特异性, 灵敏度, 测量范围和精确度:

该实验方法是专门测定L-苹果酸含量,D-苹果酸,L-乳酸,L-天冬氨酸和延胡索酸不反应。

检测中zui小吸光光度差异0.005个吸光度单位,这相当于zui大样品体积为2.00 mLL-苹果酸浓度为0.12 mg/L(或相当于样品体积为0.10 mL时,浓度为2.49 mg/L)。检测限为0.25 mg/L,这是在zui小吸光光度差异为0.010吸光光度单位,zui大样品体积为2.00 mL得到的。

该实验的线性检测范围为0.5-30ug L-苹果酸。同一样品进行重复测定,吸光度值可能会产生 0.005-0.010吸光度单位的差异。当样品体积为0.10 mL,这相当于L-苹果酸浓度大约在2.49-4.98 mg/L之间。如果样品是经过稀释的,在计算结果时候需要乘以相应的稀释系数(F,如果在样品制备阶段,样品被称重,如:10g/L,可能会产生0.02-0.05g/100g的差异。

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