西瓜果斑病检测，多维度精准检测

西瓜果斑病检测过程解析  

西瓜果斑病（由西瓜嗜酸菌Acidovoraxcitrulli引起）的检测需结合田间症状观察、实验室分离鉴定与分子/免疫学技术，具体流程如下：  

田间症状诊断  

子叶/真叶阶段：初期表现为水渍状暗绿色小斑点，后扩展为多角形或不规则黄褐色病斑，湿度大时叶背分泌乳白色菌脓；子叶沿主脉出现黑褐色坏死斑，真叶病斑周围具黄色晕圈。  

果实阶段：果面初现墨绿色水渍状斑点，迅速扩展为橄榄色凹陷溃疡斑，病部果肉腐烂、液化，溢出琥珀色菌脓，严重时全果腐烂发臭。  

关键识别点：病斑边缘不规则，高温高湿下扩展迅速，与黄瓜角斑病（病斑受叶脉限制明显）易混淆，需通过实验室进一步验证。  

西瓜果斑病检测实验室分离与鉴定  

病原分离：取病健交界处组织，经75%酒精表面消毒后，用0.1%升汞液处理，无菌水冲洗后研磨，划线接种于金氏B培养基或NA培养基，28℃培养48小时，纯化菌落呈淡白色、光滑、不粘稠。  

生理生化鉴定：通过氧化酶、过氧化氢酶反应、40℃生长试验（A.citrulli可在40℃生长，而近缘种不能）、半选择性培养基（如BFB-08、TWZ）特异性反应等确认菌种。  

致病性测试：将纯化菌株制成10⁷-10⁸CFU/mL菌悬液，刺伤接种健康西瓜幼苗或果实，保湿48小时后观察是否出现典型症状，排除非致病菌。  

分子生物学检测  

PCR/实时荧光PCR：基于16SrDNA、23SrDNA或特异性基因（如upgB）设计引物/探针，检测灵敏度达3×10²CFU/mL，可区分近缘种；实时荧光PCR结合TaqMan探针可定量检测种子带菌量。  

LAMP技术：通过恒温扩增（63℃）快速检测，40分钟内完成，灵敏度达10¹CFU/mL，适合田间快速筛查。  

基因测序：对16S-23SrDNAITS区域测序，比对数据库确认菌种，避免假阳性。  

免疫学检测  

ELISA：间接法检测菌体抗原，灵敏度10⁴CFU/mL，需酶标仪读数，适合实验室批量检测。  

胶体金试纸条：单克隆抗体标记，5-15分钟肉眼判读，灵敏度10³CFU/mL，操作简便，适合田间快速诊断。  

种子健康检测  

温室试种法：播种10,000-30,000粒种子，25-35℃、高湿条件下培养18-21天，观察幼苗发病情况，国际认可但耗时、成本高。  

保湿生长盒法：蛭石/珍珠岩基质密封培养，14天完成检测，占地小、标准化，适合规模化种子检疫。