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烟草花叶病毒检测样品的收集、处理及保存方法
发布时间:2019-03-25   点击次数:479次
     烟草花叶病毒检测样品的收集、处理及保存方法
  烟草花叶病毒检测试剂盒及检测方法,属于植物病毒检测技术领域。本发明的烟草花叶病毒定量检测试剂盒包括如下分装试剂和酶标板:所述酶标板为烟草花叶病毒抗体预包被酶标板;所述分装试剂为:样品稀释液,为磷酸盐缓冲液;洗涤液,含质量分数为0.1~0.5%的Tween?20的磷酸盐缓冲液;反应终止液,浓度为1.8~2.2mol/L的H2SO4溶液;酶标抗体工作液,辣根过氧化物酶标记的浓度为2μg/ml的特异性鼠抗烟草花叶病毒单克隆抗体;显色剂;烟草花叶病毒标准品。本发明的试剂盒能够实现烟草花叶病毒的定量检测,且快速、准确度高、灵敏度高
  烟草花叶病毒检测试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验(ELISA)。往预先包被烟草花叶病毒(TMV)捕获抗体的包被微孔中,依次加入阴性对照、阳性对照、样本、HRP标记的检测抗体,经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色,TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成终的黄色。颜色的深浅和样品中的烟草花叶病毒(TMV)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),判断样品是否含有烟草花叶病毒(TMV)。
  烟草花叶病毒检测样品的收集、处理及保存方法
  1.血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,收集血液后,3000转离心10分钟将血清和红细胞迅速小心地分离。
  2.血浆:EDTA、柠檬酸盐或肝素抗凝。3000转离心30分钟取上清。
  3.细胞上清液:3000转离心10分钟去除颗粒和聚合物。
  4.组织匀浆:将组织加入适量生理盐水捣碎。3000转离心10分钟取上清。
  5.保存:如果样本收集后不及时检测,请按一次用量分装,冻存于-20℃,避免反复
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