抗性淀粉检测物质的提取及转化
更新时间：2018-10-29 点击次数：2292次
抗性淀粉检测物质的提取及转化
抗性淀粉检测可以影响人和动物日粮中各种养分的消化与吸收,对人的健康有利。在延缓糖尿病人餐后血糖上升、肥胖控制、预防肠道疾病、降低血中胆固醇和能量消化率等具有重要的生理功能。
抗性淀粉检测原理
样品经前处理后，先在沸水浴中经耐高温α-淀粉酶水解，使可消化淀粉转化成葡萄糖，离心，弃去上清液，沉淀加入一定浓度的KOH使之溶解，经葡萄糖淀粉酶作用将其转化成葡萄糖，用葡萄糖试剂盒测定葡萄糖含量，乘以0.9即换算成抗性淀粉含量。
用于抗性淀粉检测的仪器设备
a)离心机
b)电热恒温水浴锅
c)酸度计
d)分光光度计
e)电子分析天平
f)容量瓶（100mL、1000mL）
选择的试剂
除特殊说明外，实验用水为蒸馏水，试剂为分析纯。
a)乙mi
b)耐高温α-淀粉酶（120,000NU/mL）
c)2mol/L氢氧化钾溶液
d)磷酸盐缓冲液（pH5.8）
分别称取磷酸二氢钾8.34g与磷酸氢二钾0.87g,，加适量水使其溶解，定容至1000mL。
e)醋酸盐缓冲液(pH4.4)
分别量取0.2mol/L醋酸溶液30.5mL及0.2mol/L醋酸钠溶液19.5mL混匀。
f)葡萄糖淀粉酶（100,000U/mL）
g)2mol/L盐酸溶液
h)葡萄糖试剂盒
样品前处理
粮食、豆类、糕点、饼干等较干燥的样品
称取2g～5g（到0.001g）磨碎过40目筛的样品，置于放有慢速滤纸的漏斗中，用30mL乙mi分三次洗去样品中脂肪，弃去乙mi。
蔬菜、水果、各种粮豆含水熟食制品
按1：1加水在组织捣碎机中捣成匀浆（蔬菜、水果需先洗净、凉干，取可食部分）。称取5g～10g匀浆（液体样品可直接量取），于250mL锥形瓶中，加30mL乙mi振摇提取（除去样品中脂肪），过滤去除乙mi，再用30mL乙mi淋洗两次，弃去乙mi。
抗性淀粉检测含量测定
抗性淀粉提取及转化
取0.5g试样放入50mL离心管，加入10mL(pH5.8)磷酸盐缓冲溶液和1mL耐高温α-淀粉酶，沸水浴30min，冷却至室温，离心(5000r/min，20min)弃上清液；加入10mL蒸馏水，洗涤沉淀，离心弃上清液(该步骤至少重复一次)，加入6mL2mol/LKOH溶解沉淀，室温下振荡30min，促进沉淀溶解，以2mol/LHCl调pH至中性，加入5mL醋酸盐缓冲液(pH4.4)和1mL葡萄糖淀粉酶。60℃水浴45min。离心(5000r/min，20min)，收集上清液，再用10mL蒸馏水洗涤沉淀(该步骤重复两次)，离心(5000r/min，20min)，取上清液。合并所收集上清液，定容至100mL容量瓶中。用葡萄糖试剂盒测样品中葡萄糖含量，乘以0.9即为抗性淀粉的量。
葡萄糖含量的测定
根据葡萄糖试剂盒以及使用说明书，用分光光度计测定样品中葡萄糖的含量，以蒸馏水为空白管，以试剂盒自带标准液为标准管，把试剂与工作液按一定比例混合，置37℃水浴15min，以空白管调零，在505nm波长下读取各管吸光度值。
