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抗性淀粉检测物质的提取及转化
发布时间:2018-10-29   点击次数:236次
   抗性淀粉检测物质的提取及转化
  
  抗性淀粉检测可以影响人和动物日粮中各种养分的消化与吸收,对人的健康有利。在延缓糖尿病人餐后血糖上升、肥胖控制、预防肠道疾病、降低血中胆固醇和能量消化率等具有重要的生理功能。
  
  抗性淀粉检测原理
  
  样品经前处理后,先在沸水浴中经耐高温α-淀粉酶水解,使可消化淀粉转化成葡萄糖,离心,弃去上清液,沉淀加入一定浓度的KOH使之溶解,经葡萄糖淀粉酶作用将其转化成葡萄糖,用葡萄糖试剂盒测定葡萄糖含量,乘以0.9即换算成抗性淀粉含量。
  
  用于抗性淀粉检测的仪器设备
  
  a)离心机
  
  b)电热恒温水浴锅
  
  c)酸度计
  
  d)分光光度计
  
  e)电子分析天平
  
  f)容量瓶(100mL、1000mL)
  
  选择的试剂
  
  除特殊说明外,实验用水为蒸馏水,试剂为分析纯。
  
  a)乙mi
  
  b)耐高温α-淀粉酶(120,000NU/mL)
  
  c)2mol/L氢氧化钾溶液
  
  d)磷酸盐缓冲液(pH5.8)
  
  分别称取磷酸二氢钾8.34g与磷酸氢二钾0.87g,,加适量水使其溶解,定容至1000mL。
  
  e)醋酸盐缓冲液(pH4.4)
  
  分别量取0.2mol/L醋酸溶液30.5mL及0.2mol/L醋酸钠溶液19.5mL混匀。
  
  f)葡萄糖淀粉酶(100,000U/mL)
  
  g)2mol/L盐酸溶液
  
  h)葡萄糖试剂盒
  
  样品前处理
  
  粮食、豆类、糕点、饼干等较干燥的样品
  
  称取2g~5g(到0.001g)磨碎过40目筛的样品,置于放有慢速滤纸的漏斗中,用30mL乙mi分三次洗去样品中脂肪,弃去乙mi。
  
  蔬菜、水果、各种粮豆含水熟食制品
  
  按1:1加水在组织捣碎机中捣成匀浆(蔬菜、水果需先洗净、凉干,取可食部分)。称取5g~10g匀浆(液体样品可直接量取),于250mL锥形瓶中,加30mL乙mi振摇提取(除去样品中脂肪),过滤去除乙mi,再用30mL乙mi淋洗两次,弃去乙mi。
  
  抗性淀粉检测含量测定
  
  抗性淀粉提取及转化
  
  取0.5g试样放入50mL离心管,加入10mL(pH5.8)磷酸盐缓冲溶液和1mL耐高温α-淀粉酶,沸水浴30min,冷却至室温,离心(5000r/min,20min)弃上清液;加入10mL蒸馏水,洗涤沉淀,离心弃上清液(该步骤至少重复一次),加入6mL2mol/LKOH溶解沉淀,室温下振荡30min,促进沉淀溶解,以2mol/LHCl调pH至中性,加入5mL醋酸盐缓冲液(pH4.4)和1mL葡萄糖淀粉酶。60℃水浴45min。离心(5000r/min,20min),收集上清液,再用10mL蒸馏水洗涤沉淀(该步骤重复两次),离心(5000r/min,20min),取上清液。合并所收集上清液,定容至100mL容量瓶中。用葡萄糖试剂盒测样品中葡萄糖含量,乘以0.9即为抗性淀粉的量。
  
  葡萄糖含量的测定
  
  根据葡萄糖试剂盒以及使用说明书,用分光光度计测定样品中葡萄糖的含量,以蒸馏水为空白管,以试剂盒自带标准液为标准管,把试剂与工作液按一定比例混合,置37℃水浴15min,以空白管调零,在505nm波长下读取各管吸光度值。
  
  
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