膳食纤维检测的详细方法，详细到不能再详细
更新时间：2021-07-26 点击次数：1551次
膳食纤维检测酶-重量法1.原理：样品分别用α-淀粉酶、蛋白酶、葡萄糖苷酶进行酶解消化以去除蛋白质和可消化的淀粉。总膳食纤维(TDF)是先酶解，然后用乙醇沉淀，再将沉淀物过滤，将TDF残渣用乙醇和丙酮冲洗，干燥称重。不溶性和可溶性膳食纤维(IDF和SDF)是酶解后将IDF过滤，过滤后的残渣用热水冲洗，经干燥后称重。SDF是将上述滤出液用4倍量的95%乙醇沉淀，然后再过滤，干燥，称重。TDF、IDF和SDF量通过蛋白质、灰分含量进行校正。
2.适用范围AOAC991.43本方法适用于各类植物性食物和保健食品。
3.仪器
3.1烧杯：400或600ml高脚型。
3.2过滤用坩埚：玻料滤板，美国试验和材料学会(ASTM)40-60μm，Pyrex60ml(CorningNo.36060buchner，或同等的)。如下处理：(1)在灰化炉525℃灰化过夜。炉温降至130℃以下取出坩埚。(2)用真空装置移出硅藻土和灰质。(3)室温下用2%清洗溶液浸泡1小时。(4)用水和去离子水冲洗坩埚;然后用15ml丙酮冲洗然后风干。(5)在干燥的坩埚中加0.5g硅藻土，在130℃烘干恒重。(6)在干燥器中冷却1小时，记录坩埚加硅藻土重量，精确至0.1mg。
3.3真空装置：(1)真空泵或抽气机作为控制装置。(2)1L的厚壁抽滤瓶。(3)与抽滤瓶相配套的橡皮圈。
3.4振荡水浴箱：(1)自动控温使温度能保持在98±2℃。(2)恒温控制在60℃。
3.5天平：分析级，精确至±0.1mg。
3.6马福炉：温度控制在525±5℃。
3.7干燥箱：温度控制在105和130±3℃。
3.8干燥器：用二氧化硅或同等的干燥剂。干燥剂两周一次在130℃烘干过夜。
3.9PH计：注意温控，用pH4.0、7.0和10.0缓冲液标化。
3.10移液管及套头：容量100μl和5ml。
3.11分配器或量筒：(1)15±0.5ml，供分配78%的乙醇，95%的乙醇以及丙酮。(2)40±0.5ml，供分配缓冲液。
3.12.磁力搅拌器和搅拌棒。
4.试剂全过程使用去离子水，试剂不加说明均为分析纯试剂
4.1乙醇溶液：(1)85%：加895ml95%乙醇在1L量筒中，用水稀释至刻度。(2)78%：加821ml95%乙醇在1L量筒中，用水稀释至刻度。
4.2丙酮：
4.3供分析用酶：在0-5℃下储存。(1)热稳定α-淀粉酶溶液：Cat.No.A3306，SigmaChemicalCo.，St.Louis，MO63178，或Termamyl300L，Cat.No.361-6282，Novo-Nordisk，Bagsvaerd，Denmark，或等效的酶。(2)蛋白酶：Cat.No.P3910，SigmaChemicalCo.，或等效的。当天用MES/TRIS缓冲液中现配50mg/ml酶溶液。(3)淀粉葡糖苷酶溶液：Cat.No.AMGA9913，SigmaChemicalCo.，或等效的。
4.4硅藻土：酸洗(Celite545AW，No.C8656，SigmaChemicalCo.，或等效的)。
4.5洗涤液：两者挑一。(1)铬酸：120g重各酸钠Na2Cr2O7·2H2O，1000ml蒸馏水和1600ml浓硫酸。(2)实验室用液体清洁剂，预备急需清洗的(Micro，InternationalProductsCorp.，Trenton，NJ08016，或等效的)。用水配制2%溶液。
4.6MES-TRIS缓冲液：0.05mol/L，温度在24℃时pH值为8.2。(1)MES：2-(N-吗啉代)磺酸基乙烷(No.M-8250，SigmaChemicalCo.或等效的)。(2)TRIS：三羟(羟甲基)氨基甲烷(No.T-1503，SigmaChemicalCo.或等效的)。在1.7L的蒸馏水中溶解19.52gMES和12.2gTRIS，用6mol/LNaOH调pH到8.2，用水定容至2L。(注意：24℃时的pH为8.2，但是，如果缓冲液温度在20℃，pH就为8.3，如果温度在28℃，pH为8.1。为了使温度在20-28℃之间，需根据温度调整pH值。)
4.7盐酸溶液：0.561mol//L，加93.5ml6mol/L盐酸到700ml水中，用水定容至1L。
