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膳食纤维检测的详细方法,详细到不能再详细
发布时间:2021-07-26   点击次数:158次
   膳食纤维检测酶-重量法1.原理:样品分别用α-淀粉酶、蛋白酶、葡萄糖苷酶进行酶解消化以去除蛋白质和可消化的淀粉。总膳食纤维(TDF)是先酶解,然后用乙醇沉淀,再将沉淀物过滤,将TDF残渣用乙醇和丙酮冲洗,干燥称重。不溶性和可溶性膳食纤维(IDF和SDF)是酶解后将IDF过滤,过滤后的残渣用热水冲洗,经干燥后称重。SDF是将上述滤出液用4倍量的95%乙醇沉淀,然后再过滤,干燥,称重。TDF、IDF和SDF量通过蛋白质、灰分含量进行校正。
  2.适用范围AOAC991.43本方法适用于各类植物性食物和保健食品。
  3.仪器
  3.1烧杯:400或600ml高脚型。
  3.2过滤用坩埚:玻料滤板,美国试验和材料学会(ASTM)40-60μm,Pyrex60ml(CorningNo.36060buchner,或同等的)。如下处理:(1)在灰化炉525℃灰化过夜。炉温降至130℃以下取出坩埚。(2)用真空装置移出硅藻土和灰质。(3)室温下用2%清洗溶液浸泡1小时。(4)用水和去离子水冲洗坩埚;然后用15ml丙酮冲洗然后风干。(5)在干燥的坩埚中加0.5g硅藻土,在130℃烘干恒重。(6)在干燥器中冷却1小时,记录坩埚加硅藻土重量,精确至0.1mg。
  3.3真空装置:(1)真空泵或抽气机作为控制装置。(2)1L的厚壁抽滤瓶。(3)与抽滤瓶相配套的橡皮圈。
  3.4振荡水浴箱:(1)自动控温使温度能保持在98±2℃。(2)恒温控制在60℃。
  3.5天平:分析级,精确至±0.1mg。
  3.6马福炉:温度控制在525±5℃。
  3.7干燥箱:温度控制在105和130±3℃。
  3.8干燥器:用二氧化硅或同等的干燥剂。干燥剂两周一次在130℃烘干过夜。
  3.9PH计:注意温控,用pH4.0、7.0和10.0缓冲液标化。
  3.10移液管及套头:容量100μl和5ml。
  3.11分配器或量筒:(1)15±0.5ml,供分配78%的乙醇,95%的乙醇以及丙酮。(2)40±0.5ml,供分配缓冲液。
  3.12.磁力搅拌器和搅拌棒。
  4.试剂全过程使用去离子水,试剂不加说明均为分析纯试剂
  4.1乙醇溶液:(1)85%:加895ml95%乙醇在1L量筒中,用水稀释至刻度。(2)78%:加821ml95%乙醇在1L量筒中,用水稀释至刻度。
  4.2丙酮:
  4.3供分析用酶:在0-5℃下储存。(1)热稳定α-淀粉酶溶液:Cat.No.A3306,SigmaChemicalCo.,St.Louis,MO63178,或Termamyl300L,Cat.No.361-6282,Novo-Nordisk,Bagsvaerd,Denmark,或等效的酶。(2)蛋白酶:Cat.No.P3910,SigmaChemicalCo.,或等效的。当天用MES/TRIS缓冲液中现配50mg/ml酶溶液。(3)淀粉葡糖苷酶溶液:Cat.No.AMGA9913,SigmaChemicalCo.,或等效的。
  4.4硅藻土:酸洗(Celite545AW,No.C8656,SigmaChemicalCo.,或等效的)。
  4.5洗涤液:两者挑一。(1)铬酸:120g重各酸钠Na2Cr2O7·2H2O,1000ml蒸馏水和1600ml浓硫酸。(2)实验室用液体清洁剂,预备急需清洗的(Micro,InternationalProductsCorp.,Trenton,NJ08016,或等效的)。用水配制2%溶液。
  4.6MES-TRIS缓冲液:0.05mol/L,温度在24℃时pH值为8.2。(1)MES:2-(N-吗啉代)磺酸基乙烷(No.M-8250,SigmaChemicalCo.或等效的)。(2)TRIS:三羟(羟甲基)氨基甲烷(No.T-1503,SigmaChemicalCo.或等效的)。在1.7L的蒸馏水中溶解19.52gMES和12.2gTRIS,用6mol/LNaOH调pH到8.2,用水定容至2L。(注意:24℃时的pH为8.2,但是,如果缓冲液温度在20℃,pH就为8.3,如果温度在28℃,pH为8.1。为了使温度在20-28℃之间,需根据温度调整pH值。)
  4.7盐酸溶液:0.561mol//L,加93.5ml6mol/L盐酸到700ml水中,用水定容至1L。
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