当样品溶液滴入样品孔后,样品溶液中的孔雀石绿与金标抗体相结合,进而封闭金标抗体上孔雀石绿的抗原结合点,阻止金标抗体与纤维素膜上孔雀石绿蛋白偶联物结合,使之显色较弱,甚至不显色;反之,如样品溶液中没有孔雀石绿,则不能阻止金标抗体与纤维素膜上的孔雀石绿蛋白偶联物结合,从而显色较强。
在试纸条的中央判读区喷有2条线,上面一条为对照线(C线),下面一条为测试线(T线)。若样品液中没有孔雀石绿,则T线显色比C线强,或显色与C线相近;若样品中孔雀石绿的浓度大于检测*,则T线始终显绿色,C线始终显红色。
快速检测条的操作步骤:
样品处理:取水产品可食部分用剪刀剪碎或绞肉机绞碎后准确称取10.0g于50mL离心管中,加入提取剂A5mL,提取剂B7mL,混匀振摇5分钟后用滤纸过滤,取上清液4mL于50mL刻度离心管中,加缓冲液3滴,然后用蒸馏水稀释至25mL。
过层析柱(活化层析柱,依次加1..5mL活化剂,4mL蒸馏水,洗耳球上加压,废液舍弃):连接抽提装置,分次把上清液加入层析柱中,用抽提装置从下口加压,加快流速,建议25mL样本通过柱子的时间为5-8min。待样液*流干后加4mL蒸馏水洗涤层析柱。
3、衍生化:将1mL衍生化试剂(用滴瓶滴22滴)加到层析柱中,用洗耳球加压*流干后,再加入2mL蒸馏水挤干,再用1mL洗脱液洗脱[注意:要控制流速尽可能慢](先用滴瓶滴11滴洗脱,用洗耳球加压挤干,废液舍弃,再滴入11滴洗脱,用离心管收集),加1滴缓冲液后振荡混匀待检。